Maternal schistosomiasis: IL-2, IL-10 and regulatory T lymphocytes to unrelated antigen in adult offspring mice

Abstract INTRODUCTION: We evaluated IL-10, IL-2 and regulatory T cells (Treg), in response to ovalbumin (OA), in offspring from schistosomotic mouse mothers. METHODS: We used animals born (BIM) or suckled (SIM) from infected mothers; and mice born/suckled from infected (BSIM) or non-infected mothers (CONTROL). After OA+adjuvant immunization, spleen cells were cultured, with or without OA, and doubly marked for cytometry. RESULTS: BIM showed fewer CD4+/IL-2+ and more B220+/IL-10+ cells, whereas the SIM group showed increased Treg frequency. BSIM had fewer B220+/IL-10+ and Treg cells. CONCLUSIONS: Separately, gestation or nursing induced immunosuppressive cells in infected mothers, but improved anti-OA immunity when combined.

Ex vivo T-lymphocyte chemokine receptor phenotypes in patients with chronic Chagas disease

Abstract INTRODUCTION: Elucidating the molecules involved in the inflammatory process of chronic Chagas disease may allow identification of treatment targets. METHODS: The ex vivo phenotypic expression of chemokine receptors CCR1, CCR3, CCR4, CCR5, CXCR2, CXCR3, CXCR4, and CXCR5 on the CD4+ and CD8+ T-cells of patients with chronic Chagas cardiomyopathy of varying severity was evaluated using flow cytometry. RESULTS: Differential expression of CD4+CCR3+ and CD8+CCR4+ T-cells was observed in patients with mild cardiac involvement compared, respectively, with patients with severe cardiac and asymptomatic forms of Chagas disease. CONCLUSIONS: These receptors are possibly involved in the pathogenesis of chronic Chagas cardiomyopathy.

Gestation and breastfeeding in schistosomotic mothers differently modulate the immune response of adult offspring to postnatal Schistosoma mansoni infection

Schistosoma mansoni antigens in the early life alter homologous and heterologous immunity during postnatal infections. We evaluate the immunity to parasite antigens and ovalbumin (OA) in adult mice born/suckled by schistosomotic mothers. Newborns were divided into: born (BIM), suckled (SIM) or born/suckled (BSIM) in schistosomotic mothers, and animals from noninfected mothers (control). When adults, the mice were infected and compared the hepatic granuloma size and cellularity. Some animals were OA + adjuvant immunised. We evaluated hypersensitivity reactions (HR), antibodies levels (IgG1/IgG2a) anti-soluble egg antigen and anti-soluble worm antigen preparation, and anti-OA, cytokine production, and CD4+FoxP3+T-cells by splenocytes. Compared to control group, BIM mice showed a greater quantity of granulomas and collagen deposition, whereas SIM and BSIM presented smaller granulomas. BSIM group exhibited the lowest levels of anti-parasite antibodies. For anti-OA immunity, immediate HR was suppressed in all groups, with greater intensity in SIM mice accompanied of the remarkable level of basal CD4+FoxP3+T-cells. BIM and SIM groups produced less interleukin (IL)-4 and interferon (IFN)-g. In BSIM, there was higher production of IL-10 and IFN-g, but lower levels of IL-4 and CD4+FoxP3+T-cells. Thus, pregnancy in schistosomotic mothers intensified hepatic fibrosis, whereas breastfeeding diminished granulomas in descendants. Separately, pregnancy and breastfeeding could suppress heterologous immunity; however, when combined, the responses could be partially restored in infected descendants.

Spatiotemporal analysis of reported cases of acute Chagas disease in the State of Pernambuco, Brazil, from 2002 to 2013

INTRODUCTION: Control strategies to eliminate the transmission of Chagas disease by insect vectors have significantly decreased the number of reported acute cases in Brazil. However, data regarding the incidence and distribution of acute Chagas disease cases in the State of Pernambuco are unavailable in the literature. METHODS: A geographical information system was used to delineate the spatiotemporal distribution profile of the cases from 2002 to 2013 in 185 municipalities of Pernambuco based on the municipality where notification occurred. The results were presented in digital maps generated by the TerraView software (INPE). RESULTS: A total of 302 cases of acute disease were recorded in 37.8% of the municipalities, for a total of 0.13 cases per 1,000,000 inhabitants per year. Out of the 302 cases, 99.3% were reported between 2002 and 2006. The most affected municipalities were Carnaubeira da Penha, Mirandiba and Terra Nova. The risk maps showed a significant decrease in the number of notifications and a concentration of cases in the Midwest region. CONCLUSIONS: This study highlights a significant decrease in new cases of acute Chagas disease in Pernambuco starting in 2006 when Brazil received an international certification for the interruption of vectorial transmission by Triatoma infestans. However, control strategies should still be encouraged because other triatomine species can also transmit the parasite; moreover, other transmission modes must not be neglected. .

Evaluation of CD4+CD25+ T lymphocyte response time kinetics in patients with chronic Chagas disease after in vitro stimulation with recombinant Trypanosoma cruzi antigens

Introduction CD4+CD25+ T lymphocytes have been implicated in the regulation of host inflammatory response against Trypanosoma cruzi, and may be involved in the clinical course of the disease. Methods Peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic Chagas disease were cultured in the presence of T. cruzi recombinant antigens and assayed for lymphocytes at distinct time points. Results It was possible to differentiate clinical forms of chronic Chagas disease at days 3 and 5 according to presence of CD4+CD25+ T cells in cell cultures. Conclusions Longer periods of cell culture proved to be potentially valuable for prospective evaluations of CD4+CD25+ T lymphocytes in patients with chronic Chagas disease. .

Chagas disease in the State of Pernambuco, Brazil: analysis of admissions and mortality time series / Doença de Chagas no Estado de Pernambuco, Brasil: análise de séries históricas das internações e da mortalidade

INTRODUCTION: A time series study of admissions, deaths and acute cases was conducted in order to evaluate the context of Chagas disease in Pernambuco. METHODS: Data reported to the Information Technology Department of the Brazilian National Health Service between 1980 and 2008 was collected for regions and Federal Units of Brazil; and microregions and municipalities of Pernambuco. Rates (per 100,000 inhabitants) of hospitalization, mortality and acute cases were calculated using a national hospital database (SIH), a national mortality database (SIM) and the national Information System for Notifiable Diseases (SINAN), respectively. RESULTS: The national average for Chagas disease admissions was 0.99 from 1995 to 2008. Pernambuco obtained a mean of 0.39 in the same period, with the highest rates being concentrated in the interior of the state. The state obtained a mean mortality rate of 1.56 between 1980 and 2007, which was lower than the national average (3.66). The mortality rate has tended to decline nationally, while it has remained relatively unchanged in Pernambuco. Interpolating national rates of admissions and deaths, mortality rates were higher than hospitalization rates between 1995 and 2007. The same occurred in Pernambuco, except for 2003. Between 2001 and 2006, rates for acute cases were 0.56 and 0.21 for Brazil and Pernambuco, respectively. CONCLUSIONS: Although a decrease in Chagas mortality has occurred in Brazil, the disease remains a serious public health problem, especially in the Northeast region. It is thus essential that medical care, prevention and control regarding Chagas disease be maintained and improved.

INTRODUÇÃO: Foi realizado estudo de séries históricas de internações, óbitos e casos agudos por doenças de Chagas objetivando avaliar o contexto desta enfermidade em Pernambuco. MÉTODOS: Foram coletados dados notificados de 1980 a 2008 ao Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS/MS) para regiões e unidades federativas do Brasil, microrregiões e municípios pernambucanos. As taxas (por 100.000 habitantes) de internações, mortalidade e casos agudos foram obtidas por consulta ao Sistema de Informações Hospitalares (SIH), Sistema de Informação sobre Mortalidade (SIM) e Sistema de Informações de Agravos de Notificação (SINAN), respectivamente. RESULTADOS: A média de internações nacional por doença de Chagas ficou em 0,99 no período de 1995 a 2008. Pernambuco, neste intervalo, apresentou média de 0,39, com as maiores taxas concentradas no interior do estado. Este estado obteve média de óbitos 1,56 entre 1980 e 2007, valor inferior a brasileira (3,66). O país demonstrou declínio de óbitos na análise de tendência, com Pernambuco encontrando-se em estado estacionário para esta taxa. Interpolando os dados referentes a internações e óbitos, evidenciou-se mortalidade em valores superiores as taxas de internações nacionais, entre 1995 e 2007. O mesmo fato ocorreu em Pernambuco, exceto em 2003. Entre 2001 e 2006, a taxa de casos agudos foi de 0,56 e 0,21 respectivamente para Brasil e para Pernambuco. CONCLUSÕES: Mesmo o Brasil demonstrando redução na mortalidade, a doença permanece como grave problema de saúde pública, principalmente no nordeste. Desta forma, é fundamental a manutenção e melhoria das ações de atenção médica, controle e prevenção já existentes.

A comparative analysis of the suitability of different peripheral blood samples for reverse transcriptase polymerase chain reaction / Análise comparativa da adequação de diferentes amostras de sangue periférico em ensaios de reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa

Venipuncture is one of the easiest clinical procedures to obtain viable blood samples to evaluate gene expression using mRNA analysis. However, the use of this sample type in reverse transcriptase polymerase chain reaction tests (RT-PCR) without prior treatment is controversial. We therefore propose to compare the suitability of different peripheral blood samples (whole blood without treatment, whole blood with hemolysis, peripheral blood mononuclear cells and frozen whole blood) for RT-PCR analysis. The results showed that, despite the blood sample being peripheral, it is possible to extract a fair amount of RNA and perform target gene amplification. Thus, peripheral blood without prior treatment could be used to investigate the gene expression using Real Time PCR.

A punção venosa representa um dos procedimentos clínicos mais simples na obtenção de amostras de sangue periférico e avaliação da expressão gênica através da análise do RNA mensageiro. Contudo, a utilização desta amostra, sem um tratamento prévio, em ensaios de Transcrição Reversa (RT-PCR) é controverso. Desta forma, propomos comparar a adequação de diferentes amostras de sangue periférico (sangue total sem tratamento, sangue total após hemólise, células mononucleares do sangue periférico e sangue total congelado) em ensaios de Transcrição Reversa Os resultados mostraram que independente da amostra de sangue periférico é possível extrair RNA em quantidade adequada e realizar a amplificação do gene alvo. Desta forma, o sangue periférico sem tratamento prévio pode ser utilizado em abordagens que envolvam a avaliação da expressão gênica por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real.

Coleções biológicas do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães da Fundação Oswaldo Cruz: análise de um workshop / Biological collections from Aggeu Magalhães Research Center, Oswaldo Cruz Foundation: analysis of a workshop

Sob os auspícios da Vice-Diretoria de Pesquisas, Desenvolvimento Tecnológico e Serviços de Referência do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães (CPqAM) da Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz), foi realizado em 18 de fevereiro de 2009 o I Encontro de Curadores de Coleções Biológicas do CPqAM, tendo como objetivos discutir a legislação aplicada às atividades de coleções biológicas e uniformizar os procedimentos adotados para o gerenciamento e garantia da quantidade dos acervos. No encontro foram apresentadas as quatro relações mantidas no CPqAM, reconhecidas pelo Fórum Permanente de Coleções Biológicas da Fiocruz: Coleções de Bactérias (Coleção de Culturas de Yersinia spp e Coleção de Bactérias NB2); Coleção de Vírus (Banco de Vírus do LaVITE) e Coleção Helmintológica (Laboratório de Esquistossomose). Foram tratados com destaque os aspectos de biossegurança e de biosseguridade. Constatou-se a necessidade de serem aplicados esforços no sentido de solucionar algumas inconformidades relativas a infraestrutura física, disponibilidade de recursos humanos e padronização da documentação, além da informatização dos dados do acervo do CPqAM.

Resposta atenuada ao PPD no diagnóstico de infecção tuberculosa latente em pacientes com artrite reumatoide / Attenuated response to PPD in the diagnosis of latent tuberculosis infection in patients with rheumatoid arthritis

INTRODUÇÃO: A utilização dos anti-TNF's na prática reumatológica tornou obrigatória a identificação de casos de infecção tuberculosa latente (ITBL) antes do início do tratamento, utilizando o PPD, RX de tórax e história de contato com tuberculose. Os pacientes com artrite reumatoide (AR) apresentam uma anormalidade da função celular imune, caracterizada por diminuição da responsividade de células mononucleares periféricas (linfócitos T Reg), o que acarreta prejuízo para a hipersensibilidade cutânea tardia, o que é fundamental para o reconhecimento de antígenos, como é o caso do PPD. OBJETIVOS: Avaliar a resposta ao PPD em pacientes com AR, comparado com pessoas saudáveis em uma área endêmica de tuberculose, como é o estado de Pernambuco. METODOLOGIA: Foram estudados 96 pacientes, 48 com AR e 48 indivíduos saudáveis, sendo a maioria do sexo feminino; foi realizada a inoculação de 0,1 mL do PPD RT-23, por via intradérmica e leitura da induração 72 horas após. RESULTADOS: No grupo AR o tempo médio de diagnóstico foi de 10,2 anos, a dose média de metotrexate foi de 15,5 mg/semana, dose média de prednisona foi de 12,7 mg/dia e a atividade média da doença medida pelo CDAI foi 30,4. Houve maior positividade do PPD no grupo de comparação (33,3 por cento) quando comparado com o grupo AR (14,6 por cento), com diferença estatisticamente significante (p = 0,034). CONCLUSÕES: Os autores alertam para o fraco desempenho do PPD para diagnóstico de ITBL em pacientes com AR e da necessidade de se fazer uma triagem ainda mais cuidadosa antes do início do tratamento com anti-TNF.

INTRODUCTION: With the introduction of Tumor Necrosis Factor Inhibitors (anti-TNFs) into rheumatological practice, it has become obligatory to identify cases of latent tuberculosis infection (LTBI) prior to the start of treatment, using PPD, chest radiography and clinical history of tuberculosis contact. Patients with Rheumatoid Arthritis (RA) have an abnormality of the cellular immune function, characterized by decreasing responsiveness of peripheral mononuclear cells (T Reg lymphocytes), leading to a loss in delayed hypersensitivity, which is fundamental for the recognition of antigens, such as PPD. OBJECTIVES: The purpose of our study was to evaluate the response to PPD in patients with RA, compared with healthy people, in an area where tuberculosis is endemic, as is the state of Pernambuco. METHODOLOGY: We studied 96 patients, 48 with RA and 48 healthy subjects, most of them females. All patients were given an interdermic injection of 0.1 mL PPD RT-23. The reading of the PPD result was carried out 72 hours after application, by way of palpation of maximum transverse diameter of induration, and the result was expressed in millimeters. RESULTS: In the RA group, the average time of diagnosis was 10.2 years, the average dosage of methotrexate was 15.5 mg / week, the average dosage of prednisone 12.7 mg / day and the average activity of the disease, measured using CDAI, was 30.4. In the healthy subjects group there was a greater number of positive PPD results (33.3 percent) when compared with the results for the RA group (14.6 percent), with a statistically significant difference (p = 0.034). CONCLUSION: The performance of PPB in LTBI diagnosis is poor in patients with RA. These results suggest that more careful screening needs to be undertaken before treatment with an anti-TNF drug.

Contribuição da reação de Guerreiro e Machado para o diagnóstico da doença de Chagas / Contribution of the reaction of Guerreiro and Machado in the diagnosis of Chagas disease

Revisões históricas aos avanços científicos para o controle da doença, o Simpósio Internacional Comemorativo do Centenário da Descoberta da Doença de Chagas (1909-2009).

Avanços biotecnológicos para o diagnóstico das doenças infecciosas e parasitárias / Biotechnology advances for diagnosis of infectious and parasitic diseases

Os recentes surtos epidêmicos de doenças emergentes e reemergentes têm demonstrado a importância da aplicação de medidas de controle e prevenção. Para que tais medidas sejam eficazes, o desenvolvimento de métodos de diagnóstico acurados é essencial. Os métodos decorrentes do aprimoramento da biologia molecular e celular têm propiciado a utilização de técnicas diagnósticas que produzem um resultado confiável em poucos minutos ou horas. Os ensaios imunocromatográficos, a PCR e suas variações, a tecnologia de microarranjos de DNA, a citometria de fluxo e a análise do proteoma constituem exemplos. Alguns desses métodos já estão disponíveis em laboratórios, especialmente os da rede privada. Contudo, a interpretação dos resultados requer níveis diferentes de conhecimento, o que torna necessária a capacitação de recursos humanos para sua maior difusão e aproveitamento. Espera-se, portanto, que o surgimento de novas tecnologias resulte no desenvolvimento de novas drogas e terapias e, sobretudo, de métodos diagnósticos que auxiliem a investigação epidemiológica e promovam melhorias na qualidade de vida da população ao se implantar rapidamente o tratamento.

Abordagem diagnóstica da tuberculose latente na artrite reumatóide: [revisão] / Latent tuberculosis diagnosis in rheumatoid arthritis: [review]

Apesar de terem revolucionado a prática reumatológica, o uso dos inibidores do fator de necrose tumoral (anti-TNFs) no tratamento da artrite reumatóide (AR) fez surgir um problema considerado solucionado em muitos países desenvolvidos: o risco elevado de reativação de infecção tuberculosa latente (ITBL). Desse modo, a identificação de casos de ITBL passou a ser obrigatória antes do início da terapêutica com anti-TNF. O teste cutâneo da tuberculina (PPD) não é um teste de screening ideal nesse grupo de pacientes em virtude de sua baixa especificidade, sua reação cruzada com antígenos vacinais e de outras micobactérias ambientais e, principalmente, por conta da incapacidade de o paciente com AR produzir uma resposta adequada ocasionada por uma anormalidade na responsividade das células T, característica da doença. Ensaios com base na detecção da produção de IFNgama in vitro por células mononucleares periféricas estimuladas por antígenos específicos (ESAT-6 e CFP-10), que não são encontrados na vacina BCG nem em outras micobactérias ambientais, parecem ser mais acurados que o PPD na detecção de ITBL em virtude de maior especificidade, melhor correlação com medidas indiretas de exposição ao Mycobacterium tuberculosis e menor reação cruzada com a vacinação por BCG e infecções por outras micobactérias.

Despite representing a major advance in rheumatology practice, the use of tumor necrosis factor blockade (anti-TNFs) in the treatment of rheumatoid arthritis (RA) has given rise to a problem that was considered solved in many developed countries, i.e. the heightened risk of reactivation of latent tuberculosis infection (LTBI). The identification of cases of LTBI has thus been made obligatory prior to starting any anti-TNF treatment. The cutaneous tuberculin test (PPD) is not the ideal screening test for this group of patients. Low specificity, cross-reactivity with vaccine antigens and other exogenous microorganisms coupled to a defect in the cell-mediated component of the immunological response account for the inadequacy of PPD as a screening tool in this subset of patients. Assays using the detection of in vitro IFNgamma production by peripheral blood mononuclear cells stimulated by specific antigens (ESAT-6 and CFP-10), which are found neither in the BCG vaccine nor in other micro-organisms in the environment should perform better than the PPD, owing to a presumed higher specificity as well as to correlation with indirect measures of exposure to Mycobacterium tuberculosis besides decreased cross-reactivity determined by prior BCG vaccination and/or other infections.

Saúde pública e ética na era da medicina genômica: rastreamentos genéticos / Public health and ethics in the age of genomic medicine: genetic screening

O presente artigo tem como objetivo contextualizar o campo da saúde pública diante dos grandes avanços da biotecnologia e genética aplicada, destacando elementos para a problematização do tema tais como benefícios e questões éticas relacionados aos rastreamentos genéticos. O Projeto Genoma Humano gerou várias expectativas, dentre elas, a possibilidade de rastrear genes associados a doenças e comportamentos, e mais ainda, de intervir geneticamente no ser humano, levantando preocupações relativas ao renascimento da eugenia, ao aconselhamento genético, e ao uso da informação genética como critério de acesso aos planos de saúde e postos de trabalho. Uma discussão de todos esses tópicos é essencial para que a saúde pública seja beneficiada com as informações obtidas através da análise genômica das populações.

Avaliação hematológica e histopatológica de camundongos BALB/c e C57BL/6 expostos aos antígenos recombinantes Cytoplasmic Repetitive Antigen e Flagellar Repetitive Antigen de Trypanosoma cruzi / Hematological and histopathological evaluation of BALB/c and C57BL/6 mice exposed to Cytoplasmic Repetitive Antigen and Flagellar Repetitive Antigen recombinant antigens of Trypanosoma cruzi

Os antígenos recombinantes Cytoplasmic Repetitive Antigen e Flagellar Repetitive Antigen de Trypanosoma cruzi foram inoculados em camundongos BALB/c e C57BL/6 e o seu efeito avaliado a nível hematológico e histopatológico. Os resultados mostraram que o padrão histológico normal dos órgãos e o perfil hematológico dos camundongos não foram modificados sugerindo que esses antígenos não parecem causar dano ao animal.

Diagnóstico da hemoglobina S: análise comparativa do teste de solubilidade com a eletroforese em pH alcalino e ácido no período neonatal / S Hemoglobin diagnosis: comparative analysis of the solubility test with the electrophoresis in alkaline and acid pH during the neonatal period

OBJETIVOS: avaliar a eficácia do teste de solubilidade como método de triagem na detecção de Hb S no período neonatal, comparando-o com as técnicas de eletroforese em pH alcalino e ácido. MÉTODOS: o sangue de cordão umbilical de 1.988 recém-nascidos (RN) na maternidade do Instituto Materno-Infantil de Pernambuco (IMIP), durante o período outubro de 1996 a março de 1997, foi submetido à eletroforese de hemoglobina em pH alcalino e ao teste de solubilidade. A eletroforese de hemoglobina em pH ácido foi realizada como teste confirmatório em todos os casos em que a eletroforese em pH alcalino foi positiva para Hb S ou Hb C. RESULTADOS: a eletroforese de Hb em pH alcalino detectou a presença de Hb S em 105 (5,3 por cento) amostras. A análise dessas 105 amostras através da eletroforese em pH ácido mostrou que 98 (93,3 por cento) mantiveram o mesmo padrão eletroforético. O teste de solubilidade detectou apenas um RN portador de Hb S. CONCLUSÕES: a eletroforese de Hb em pH alcalino mostrou-se eficaz no diagnóstico da hemoglobina S no período neonatal, podendo ser utilizada nos locais onde técnicas mais sofisticadas não estão implantadas. O teste de solubilidade não serve como abordagem diagnóstica para a presença de Hb S no período neonatal.

Evaluation of the immune response to CRA and FRA recombinant antigens of Trypanosoma cruzi in C57BL/6 mice

Humoral and cellular immune responses were evaluated in 44 C57BL/6 mice immunized with the Trypanosoma cruzi recombinant antigens CRA and FRA. Both antigens induced cutaneous immediate-type hypersensitivity response. The levels of IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3 were high in CRA immunized mice. IgG3 was the predominant isotype. Although no difference in antibody levels was observed in FRA-immunized mice when compared to control mice, both antigens were able to induce lymphoproliferation in immunized mice. Significant differences were observed between incorporation of [ H]- thymidine by spleen cell stimulated in vitro with CRA or FRA and the control group. These results suggest that CRA and FRA could be involved in mechanisms of resistance to Trypanosoma cruzi infection

Partial protection of mice against Trypanosoma cruzi after immunizing with the TcY 72 antigenic preparation

A 72 kDa Trypanosoma cruzi glycoprotein recognized by the 164C11 monoclonal antibody (IgM isotype) was purified by preparative electrophoresis. The antigenic preparation obtained, named TcY 72, was used to immunize C57Bl/10 mice. The following results were observed after immunization: (1) induction of higher titres of IgG than IgM antibodies, as evaluated by indirect immunofluorescence; (2) significant DTH after infection of epimastigotes in mice footpads: (3) peak parasitemia in immunized mice was significantly reduced and animals were negative by 13 days post-infection, although the mice still succumb to infection: (4) the phenotypic analysis of spleen cell populations showed a decrease in the CD4/CD8 ratio in immunized mice. Taken as a whole, these findings indicate that TcY 72 is immunogenic and potentially important for protective immunity.